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湖南腹膜透析液外泌體示蹤

外泌體(exosome)是多種活細胞經(jīng)過“內(nèi)吞–融合–外排”等一系列過程主動向胞外分泌的直徑為30~150 nm的雙層膜結(jié)構(gòu)細胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs), 廣fan存在于血液、尿液和唾液等生物體液中, 并通常作為細胞間胞質(zhì)蛋白、核酸和脂質(zhì)的轉(zhuǎn)移載體發(fā)揮運輸調(diào)控作用, 被認為是細胞間通訊的核xin部分。外泌體于1983年在HARDING等和PAN等研究羊網(wǎng)織紅細胞分化的過程中被發(fā)現(xiàn), 并于1996年由RAPOSO等證實能夠作為一種細胞間通訊結(jié)構(gòu)在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮作用后得到了廣fan關(guān)注。近年來, 隨著外泌體在中流、心血管和感ran性疾病等多種疾病形成中的生物學作用和功能被逐漸揭示, 尤其是2015年MELO等發(fā)現(xiàn), 外泌體Glypican-1蛋白可有效區(qū)分慢性胰腺炎與胰腺ai以來, 外泌體作為疾病診斷、預后預測標志物以及藥物靶向zhiliao載體的轉(zhuǎn)化醫(yī)學應用也得到了迅速的推進。免疫磁珠捕獲法提取外泌體簡單省時且分離純度較高,可用于臨床。湖南腹膜透析液外泌體示蹤

通過對28例前列腺ai癥患者和19例正常人尿液外泌體中的miRNA進行深度測序分析,發(fā)現(xiàn)兩種miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者組明顯下調(diào),表明尿液外泌體中的特異性miRNA可能作為前列腺ai的新型生物標志物。Khurana等[100]將研究對象由miRNAs擴大至多種類型RNA,通過對慢性腎病患者尿液外泌體中各類RNA進行系統(tǒng)研究,在慢性腎病患者組中識別出30種明顯差異的lncRNAs,表明尿液外泌體中的lncRNAs具有作為慢性腎病早期診斷標志物的潛力。Skotland等的研究則表明尿液外泌體中的脂質(zhì)能夠作為前列腺ai的新型標志物,3種脂質(zhì)標志物結(jié)合使用能夠有效提高對前列腺ai的診斷靈敏度(93%)和特異性(100%)。河南體液外泌體透射電鏡檢測干細胞外泌體因在上皮組織的增殖、遷移、再生、炎癥和瘢痕控制等方面的作用。

由于卵巢中流細胞質(zhì)膜上的磷脂酰絲氨酸(phosphati[1]dylserine,PS)可以外泌體形式分泌入血,惡性卵巢ai患者血漿外泌體中的PS水平明顯高于卵巢良xing病變患者和健康對照者,因此外泌體中的PS可用于協(xié)助早期卵巢惡性中流的篩查和診斷。外泌體可穿透血-腦脊液屏障的特點也為腦中流患者提供了早期診斷的重要工具。血漿微囊泡EGFRvIII mRNA已被證明可作為膠質(zhì)母細胞瘤患者診斷的支持證據(jù)。2020年,David Lyden和William R. Jarnagin教授團隊合作,通過探究來自不同ai種組織、血漿和其他體液的426個人類樣品中細胞外囊泡和顆粒(extracellular vesicle and particle,EVP)的蛋白質(zhì)組學特征,鑒定出一批中流特異性血漿EVP蛋白(特異度和靈敏度分別為95%和90%),并可區(qū)分患者的中流類型,使基于外泌體的中流診斷和鑒別診斷向前邁進了一步。

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同, 又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法, 前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離, 介質(zhì)密度均小于外泌體密度, 離心時樣品在向超速離心管底部移動時, 會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶, 密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層, 更快地到達管底, 因此控制離心的時間很重要; 等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶, 則會根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來進行組合, 離心過程中, 無論離心時間多久, 不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶, 而不會沉淀到底部。目前,天然或者工程化修飾的外泌體被視為一種理想工具用于zhiliao一些難治性中流。

在Rameshwar等的研究中,采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9。在進行間充質(zhì)細胞和多形性成角質(zhì)細胞瘤(GBM)細胞間anti-miR-9傳遞的實驗時,發(fā)現(xiàn)兩種細胞不僅可以通過縫隙連接介導的細胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實現(xiàn),而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9,顯示出外泌體在運載miRNA進行基因zhiliao時的潛力。利用外泌體進行GBM的zhiliao不只停留在體外細胞實驗上,也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報道。外泌體在組織修復領域均起著重要的作用,并且可以作為很好靶向給藥系統(tǒng)。黑龍江腹水外泌體western blot

PD-L1除表達于細胞膜外,還可以外泌體型或可溶型形式分泌到細胞外。湖南腹膜透析液外泌體示蹤

微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測平臺, 這些方法包括免疫親和分離、膜過濾、納米線捕獲、聲納米過濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡組成的緊湊單元, 能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品; 且根據(jù)特定的功能, 微通道可以相互連接, 使用額外的特定裝置來微調(diào)流體運動。微流控技術(shù)能夠以極高的準確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實驗室過程, 取代昂貴的設備, 基于微流控技術(shù)的電化學外泌體檢測芯片已經(jīng)受到廣fan關(guān)注。湖南腹膜透析液外泌體示蹤

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