流式多因子檢測(cè)技術(shù)(CBA)微球免疫分析系統(tǒng)CBA(CytometricBeadArray)是一個(gè)基于流式細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測(cè)方法,它能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。CBA是種結(jié)合流式細(xì)胞儀熒光檢測(cè)和微球免疫分析的應(yīng)用技術(shù),可以輕松的在短時(shí)間內(nèi),同時(shí)檢測(cè)多種蛋白,其作用原理利用熒光強(qiáng)度不同的微球,上面帶有可以辨認(rèn)特定蛋白的抗體(captureantibody),與樣本(例如血清、血漿、培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液等)及PE檢測(cè)抗體(detectionantibody)作用后,以流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析,根據(jù)PE熒光強(qiáng)度的不同用FCAPArray軟件進(jìn)行分析和標(biāo)準(zhǔn)品做比對(duì)后,可進(jìn)行樣本內(nèi)特定,蛋白的定性或定量。CBA具有以下優(yōu)點(diǎn):每次檢測(cè)需25-50ul樣本;靈敏度可達(dá)0.274pg/ml時(shí)間t夬速,需3-4小時(shí),快速上樣可同時(shí)測(cè)定30種蛋白,實(shí)驗(yàn)可重復(fù)性高利用FCAPArray軟件,不論樣本數(shù)目多少,可快速分析完成分析Luminex既能檢測(cè)蛋白,又能檢測(cè)核酸。免疫磁珠分選細(xì)胞的意義
免疫組化染色呈陰性結(jié)果的原因有哪些?1)、抗體濃度和質(zhì)量問題以及抗體來源選擇錯(cuò)誤。不知抗體是進(jìn)口的還是國產(chǎn)的工作液,怎么這么高稀釋度也沒能做出陽性結(jié)果?另外,不是抗體濃度越高就越易出現(xiàn)陽性結(jié)果,抗原抗體反應(yīng)有前帶和后帶效應(yīng),必須摸索比較好濃度。2)、抗原修復(fù)不全,對(duì)于甲醛固定的組織必須用充分抗原修復(fù)來打開抗原表位,以利于與抗體結(jié)合;建議微波修復(fù)用高火4次*6min試試。有人做過實(shí)驗(yàn),這是比較好的時(shí)間和次數(shù)。若不行,還可高壓修復(fù)。3)、組織切片本身這種抗原含量低;4)、血清封閉時(shí)間過長(zhǎng)。5)、DAB孵育時(shí)間過短。6)、細(xì)胞通透不全,抗體未能充分進(jìn)入胞內(nèi)參與反應(yīng)。7)、開始做免疫組化,我建議你一定要首先做個(gè)陽性對(duì)照片,排除抗體等外的方法問題。信號(hào)通路磷酸化抗體芯片本panel可檢測(cè)以下因子:CD276/B7-H3,GITRL/TNFSF18,PD-L1 (epitope 1),PD-L2 種屬:Human。
免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。LabEx提供IHC/ICC(免疫組化/免疫熒光)實(shí)驗(yàn)服務(wù),提供樣本細(xì)胞涂片、細(xì)胞爬片、組織冰凍切片、組織石蠟切片;或組織、蠟塊均可。一抗(可幫忙提供,費(fèi)用另計(jì))。
液相懸浮芯片技術(shù)產(chǎn)品多因子技術(shù)可同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣本的多個(gè)指標(biāo),如通路中多個(gè)相關(guān)蛋白的共檢測(cè)。雖然液相蛋白定量檢測(cè)的技術(shù)很多,但是大多數(shù)的技術(shù)能對(duì)樣本進(jìn)行單一指標(biāo)的檢測(cè),同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)時(shí)則需要提供大量的樣本分批檢測(cè),操作繁瑣,且各指標(biāo)間差異性較大。對(duì)于樣本量較少或需要對(duì)比各指標(biāo)的用戶,傳統(tǒng)的技術(shù)無法滿足需要。日常實(shí)驗(yàn)中,常需對(duì)溶液體系中的可溶性蛋白進(jìn)行定量檢測(cè),如細(xì)胞培養(yǎng)上清或血清中的細(xì)胞因子含量的定量分析,由于這些因子的含量較少,低于一般常規(guī)方法的檢測(cè)下限,使用常規(guī)的蛋白檢測(cè)方法如WesternBlot等很難檢測(cè)。而多因子技術(shù)樣本需求量少(25~60μL/孔),檢測(cè)指標(biāo)多,可兼容血清/血漿,細(xì)胞上清,細(xì)胞/組織裂解液,腦脊液等多種生物學(xué)體液。其靈敏度高(部分panel可達(dá)到亞fg/ml),寬線性范圍(達(dá)到6個(gè)log),具有高重復(fù)性(板內(nèi)CV<6-8%,板間<10%,批間<15%),適宜多類型指標(biāo)的同時(shí)測(cè)定(炎癥,趨化,代謝……)。本panel可檢測(cè)以下因子:Tau (pT231),Tau (total) 種屬:Human。
Luminex液相懸浮芯片是基于高通量微孔板的多重檢測(cè)抗體芯片技術(shù)。其基本原理是將高度特異的捕獲單克隆抗體偶聯(lián)到不同熒光標(biāo)記的磁珠上,將不同種類磁珠混合后懸浮于96孔微孔板中。在檢測(cè)時(shí),一束激光照射磁珠上的熒光,識(shí)別磁珠標(biāo)記的捕獲抗體,從而獲知該磁珠可檢測(cè)哪種細(xì)胞因子,從而實(shí)現(xiàn)“定性”作用。進(jìn)一步,通過加入生物素標(biāo)記的高親和配對(duì)檢測(cè)抗體,同步識(shí)別磁珠抓取的目標(biāo)細(xì)胞因子,形成“三明治”結(jié)構(gòu),并加入SA-PE偶聯(lián)上生物素,通過另一束激光照射進(jìn)行信號(hào)放大檢測(cè),實(shí)現(xiàn)“定量”作用。本panel可檢測(cè)以下因子:FGF-basic,IL-15,IL-18,LIF,M-CSF,MIG/CXCL9,MIP-2,PDGF-BB,VEGF-A 種屬:Mouse。鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子作用
本panel可檢測(cè)以下因子:A2M,AGP 種屬:Rat。免疫磁珠分選細(xì)胞的意義
抗體芯片技術(shù)服務(wù)包括:1,樣品蛋白質(zhì)抽提:a.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑,勻漿后抽提總蛋白。b.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細(xì)胞,PBS清洗細(xì)胞,去PBS加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑抽提總蛋白。c.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為血清,則直接進(jìn)入步驟3。2,蛋白質(zhì)定量:按蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作,測(cè)定樣品濃度。3.細(xì)胞因子抗體芯片封閉和抗體孵育a.細(xì)胞因子抗體芯片封閉后加入50-500ug蛋白質(zhì)(若標(biāo)本為血清,通常取100ul血清)與抗體芯片4℃孵育過夜。b.加入標(biāo)記好的抗體室溫孵育1小時(shí)。4,抗體芯片檢測(cè)5.提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告:包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法和芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果的各種圖表和數(shù)據(jù)比較。您只需提供保存完好的標(biāo)本(血清、組織或細(xì)胞、細(xì)胞上清或其他非常規(guī)液質(zhì)生物樣本),本公司專業(yè)的技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成實(shí)驗(yàn)操作與數(shù)據(jù)分析。免疫磁珠分選細(xì)胞的意義
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